【 試劑盒原理】

     轉(zhuǎn)基因快速檢測試紙用特異性抗 Cry1Ab/1Ac 單抗包被的微孔板和酶標記抗 Cry1Ab/1Ac 單抗，雙抗體夾心法檢測 Cry1Ab/1Ac 基因表達產(chǎn)物， 轉(zhuǎn)基因快速檢測試紙可以高靈敏度和特異性的檢測轉(zhuǎn)基因植物中的 Bt-Cry1Ab/1Ac 蛋白。

【試劑盒組份（規(guī)格）】

預(yù)包被板（抗 Cry1Ab/1Ac 單抗）      12 孔×8

Cry1Ab/1Ac 酶標抗體                 12 ml×1 瓶

20×濃縮洗滌液                      30 ml×1 瓶

5×抽提液/稀釋緩沖液                30 ml×1 瓶

底物液 A                            7 ml×1 瓶

底物液 B                            7 ml×1 瓶

終止液                              7 ml×1 瓶

使用說明書                          1 份

0ppb 陰性對照                       1ml

4 個不同濃度的標樣：           

0.5 ppb 1.0 ppb 2.0 ppb 4.0 ppb          各 1ml

【試劑準備】

    試劑盒中的 20×濃縮洗滌液 30 ml 加 570 ml 滅菌 ddH2O 溶解稀釋至 1×洗滌液，5×抽提液（30 ml）加 120 ml ddH2O 稀釋至 1×抽提液，4℃存放備用。

【樣品準備】

    稱取約 20 mg 葉片，加 0.5 ml 1×抽提液（使用前 30 min 放置室溫）研磨至勻漿，室溫放置 30 min，測定前把樣品上清液稀釋 5-20 倍。

    測定莖干和胚乳中的 Bt 蛋白時，樣品稱取約 40 mg，加 1 ml 1×抽提液研磨。

【ELISA 反應(yīng)】

1. 依次加 100 μl 陰性對照，標準品（4 個不同濃度的標樣：0.5 ppb，1.0 ppb，2.0 ppb, 4.0 ppb）和待測樣品至 96 孔板；

2. 用封口膜蓋住 96 孔板，快速搖動平板混勻樣品；

3. 37℃恒溫箱孵育 30 min；

4. 倒掉 96 孔板中液體，每孔加入 1×洗滌液 250 μl 洗滌微孔板，洗板 5 次，用吸水紙拍干；

5. 按順序在每個小孔中加入 100 μl Cry1Ab/1Ac 酶標抗體，然后重復步驟 2；

6. 37 ℃恒溫箱孵育 30 min；

7. 倒掉 96 孔板中液體，每孔加入 1×洗滌液 250 μl 洗滌微孔板，洗板 5 次，用吸水紙拍干；

8. 依次加入 50 μl 底物 A 液，50 μl 底物 B 液，重復步驟 2；

9. 室溫（20-25℃）避光孵育 10 min，加 50 μl 終止液，充分混勻終止反應(yīng)，15min 以內(nèi)在酶標儀上讀取結(jié)果。 在 450 nm 為主波長，630 nm 為次波長（或單波長 450 nm）下，用空白孔校零，再讀取各孔 OD 值。

【轉(zhuǎn)基因測試盒使用注意事項】

1. 測定中需使用的所有試劑和 96 孔板提前 30 min 放置室溫溫育（否則會影響試驗準確性），注意12 連管必須溫育后再從平板上取下，未使用完的預(yù)包被板條應(yīng)置于有干燥劑的封口袋中密封保存；

2. 試劑使用前應(yīng)充分搖勻；

3. 搖動平板混勻時注意避免樣品之間交叉污染；

4. 使用洗滌液漂洗時，洗滌液需要填滿每個小孔，進行充分漂洗；

5. 研磨好的樣品如果不能一次全部測量，可以暫時在 4 ℃避光保存，但是最好在 24 h 內(nèi)測定；

6. 結(jié)果判讀請在反應(yīng)終止后 15 min 內(nèi)完成。